藥品分析是保證藥品安全有效的重要手段,在藥品的研究、生產(chǎn)、流通、使用和監(jiān)督管理等環(huán)節(jié)中均有舉足輕重的作用,其主要內(nèi)容包括性狀分析、鑒別、檢查和含量測(cè)定等方面。高效液相色譜儀、氣相色譜儀、紫外分光光度計(jì)等是制藥生產(chǎn)中常用的檢測(cè)儀器。其中,紫外分光光度計(jì)由于準(zhǔn)確度高、測(cè)定限度低、設(shè)備簡便、儀器成本低、易于操作等優(yōu)點(diǎn),已成為制藥生產(chǎn)中檢測(cè)設(shè)備之一,用于藥物鑒別、檢查和含量測(cè)定等。
紫外-可見分光光度法是通過測(cè)定物質(zhì)在紫外-可見光區(qū)(200-760nm)產(chǎn)生紫外-可見吸收光譜,根據(jù)吸收光譜的特性,對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。其理論基礎(chǔ)為朗伯-比耳定律,溶液的吸光度和吸光物質(zhì)含量、液層厚度乘積成正比。對(duì)于一般的紫外分光光度法,其測(cè)量的相對(duì)誤差在1%~3%。隨著大量心得顯色劑的合成及應(yīng)用,尤其是有關(guān)多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,推進(jìn)了元素測(cè)定的靈敏度的大幅提高。采用預(yù)富集和示差法,適用質(zhì)量分?jǐn)?shù)從常量(1%~50%)到痕量(10-10~10-8)。紫外-可見分光光度法由紫外分光光度法和可見分光光度法兩種方法構(gòu)成,這兩種方法在測(cè)定的原理、儀器、操作等方面皆相同。因此,統(tǒng)稱為紫外-可見分光光度法,測(cè)定儀器一般采用紫外-可見分光光度儀。
在各國藥典中,藥品的理化常數(shù)、鑒別、檢查和含量測(cè)定等很多項(xiàng)目中,都能見到紫外分光光度法的應(yīng)用實(shí)例。
在制藥生產(chǎn)中,紫外分光光度法應(yīng)用最多的是藥物含量的測(cè)定、藥物雜質(zhì)檢測(cè)、藥物穩(wěn)定性考察、釋放度、藥物負(fù)載行為測(cè)定及物質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定等方面。 目前利用紫外分光光度計(jì)分析的藥物品種有維生素、抗生素、解熱藥、去痛藥、降血壓藥、安定藥、鎮(zhèn)咳藥、滴眼藥、磺胺類藥、利尿藥、某些婦科藥、痢疾藥、腹瀉藥、抗腫瘤藥、抗結(jié)核藥等。
一 、紫外分光光度法應(yīng)用于藥物含量測(cè)定 紫外-可見分光光度法由于靈敏度較高,不僅可用于常量組分的含量測(cè)定,也可用于測(cè)定微量組分、超微量組分以及多組分混合物同時(shí)測(cè)定等,在藥物分析中主要用于原料藥含量測(cè)定、制劑含量測(cè)定、含量均勻度和溶出度的檢查等。
1.1 含量測(cè)定的主要依據(jù) 朗伯-比耳定律是紫外-可見分光光度法含量測(cè)定的依據(jù)。朗伯-比耳定律是指單色光輻射穿過被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí),在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量(A)與該物質(zhì)的濃度(C)和液層的厚度(L)成正比,其關(guān)系如下式: 常用含量測(cè)定的方法 測(cè)定時(shí),除另有規(guī)定外,應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照,采用1cm的石英吸收池(紫外光區(qū))或玻璃吸收池(可見光區(qū)),以吸收度最大的波長作為測(cè)定波長。一般供試品溶液的吸光度讀數(shù),以在0.3~0.7的誤差最小。
1.2.1 吸收系數(shù)法 吸收系數(shù)法是利用待測(cè)物質(zhì)的吸收系數(shù)與測(cè)得的一定濃度時(shí)的吸光度比較計(jì)算含量的方法,又稱絕對(duì)法。該法是目前應(yīng)用最多的方法。用本法測(cè)定時(shí),吸收系數(shù)通常應(yīng)>100,并注意儀器的校正和檢定。
1.2.2 對(duì)照品比較法 對(duì)照品比較法是采用在相同條件下分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分規(guī)定量的(100±10)%,所用溶劑也應(yīng)一致,在規(guī)定的波長處測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸光度后,按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度,公式中,CX為供試品溶液的濃度;AX為供試品溶液的吸光度;CR為對(duì)照品溶液的濃度;AR為對(duì)照品溶液的吸光度。
1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法是紫外-可見分光光度法中的方法之一。測(cè)定時(shí),先取與被測(cè)物質(zhì)含有相同組分的標(biāo)準(zhǔn)品,配成一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在相同條件下,分別測(cè)定其吸光度。然后以濃度C為橫坐標(biāo),以相應(yīng)的吸光度A為縱坐標(biāo),繪制A-C曲線。在相同條件下,測(cè)出供試品溶液的吸光度,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上便可查出與此吸光度值對(duì)應(yīng)的供試品溶液的濃度。 由于標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)儀器的要求不高,因此是紫外-可見分光光度法中簡便易行的方法。
1.2.4 比色法 測(cè)定能吸收可見光的有色物質(zhì)、無色但經(jīng)顯色反應(yīng)可以生成有色的物質(zhì)都可以采用本法在適宜的條件下進(jìn)行測(cè)定。比色法通常稱為光電比色法,現(xiàn)代的比色分析采用分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定,故又稱可見分光光度法。 除另有規(guī)定外,比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替,對(duì)照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應(yīng)試劑,并用同樣方法處理。在規(guī)定的波長處測(cè)定對(duì)照品和供試品的吸光度后,按對(duì)照品比較法計(jì)算供試品濃度。如《中國藥典》中利血平注射液、硫酸阿托品片等一些藥物和制劑的含量采用比色法測(cè)定。
二、 紫外-可見分光光度法對(duì)原料藥的含量測(cè)定 《中國藥典》中原料藥的含量用百分含量表示。
對(duì)照品對(duì)照法:含量 式中,CR為對(duì)照品溶液的濃度(g/mL);Ax為供試品溶液的吸光度;AR為對(duì)照品溶液的吸光度;m為稱取的供試品重量(g);D為供試品的稀釋倍數(shù);V為供試品初次配制的體積(mL)。
三 紫外-可見分光光度法對(duì)制劑的含量測(cè)定 制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示。
3.1 片劑的含量測(cè)定 由于片劑含量低,且含輔料,若采用原料藥的方法測(cè)定含量則有干擾,當(dāng)片劑中主藥在紫外-可見光去有特征吸收光譜,則可采用靈敏度更高的紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。有機(jī)堿性藥物,《中國藥典》中原料藥采用非水溶液滴定法,而片劑含輔料硬脂酸鎂對(duì)非水溶液滴定法有干擾,則采用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。
3.2 注射劑的含量測(cè)定 若注射劑中主藥在紫外-可見光區(qū)有特征吸收,當(dāng)注射劑中無附加成分或附加成分不干擾,則主藥的含量測(cè)定可直接采用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量;當(dāng)附加成分有干擾,則可采用消除干擾,或利用主藥與附加成分紫外吸收光譜的差異,再進(jìn)行紫外-可見分光光度法測(cè)定主藥含量。如《中國藥典》中馬來酸氯苯那敏注射液的含量測(cè)定采用吸收系數(shù)法。